PD-1抑制剂治疗非小细胞肺癌（NSCLC）后，肿瘤内部为何会出现大量浆细胞浸润？这些浆细胞分泌的抗体到底针对什么抗原？能否被"变废为宝"用于开发新的肿瘤疗法？近期，杜克大学团队在《Cancer Cell》发表了题为“Tumor-infiltrating plasma cell profiling after PD-1 blockade reveals tumor-specific antibodies”的研究论文。该研究通过PCF(CODEX)空间单细胞蛋白组+单细胞BCR测序+重组抗体功能验证，首次系统证明了PD-1阻断诱导的肿瘤浸润浆细胞是抗肿瘤抗体的富集来源，且其识别的瓜氨酸化波形蛋白可作为CAR-T靶点，在免疫健全模型中实现无脱靶毒性的抗肿瘤效果。

研究采用了"PCF(CODEX)空间单细胞蛋白组+单细胞转录组BCR测序”前期数据挖掘的并行策略。PCF(CODEX)空间单细胞蛋白组提供了TLS成熟度和细胞空间组织的信息，scRNA-seq提供了BCR序列和B细胞分化状态。两者不是简单的"堆砌"，而是回答不同层面的问题。当样本有限但希望同时获得空间信息和单细胞分子信息时，这种"分而治之"的策略非常实用。石蜡标本做PCF(CODEX)空间单细胞蛋白组获取空间架构，新鲜/冷冻标本做scRNA-seq获取分子深度。

研究揭示了NSCLC肿瘤中存在从naive到终末分化的完整B细胞谱系，发现了肿瘤浸润B细胞（TIL-B）在瘤内经历了抗原驱动的亲和力成熟和分化。研究进一步揭示了来自多种TIL-B群体的抗体具有肿瘤细胞表面反应性，尤其是先导抗体PC-1展现出最强、最广泛的肿瘤细胞表面结合活性。研究通过20K人类蛋白组芯片等多种技术组合鉴定出PC-1识别瓜氨酸化波形蛋白，同时交叉识别瓜氨酸化钙网蛋白、p53和Hsp90，并解析了PC-1 Fab的晶体结构，预测了识别靶点的构象特征。

功能实验验证了PC-1不仅能结合肿瘤细胞，还能结合促肿瘤巨噬细胞、MDSCs和衰竭CD4⁺ T细胞，但不结合健康人PBMC或配对正常组织。构建的PC-1 CAR-T在体外和体内均展现强力抗肿瘤活性，在免疫健全模型中无任何可检测的脱靶器官毒性。PAD2是将精氨酸转化为瓜氨酸的关键酶。PAD2酶敲除后PC-1结合消失，直接证明了PC-1识别的确实是瓜氨酸化抗原而非其他修饰或非修饰抗原。

这项研究开始直接利用了PCF(CODEX)空间单细胞蛋白组，对3例NSCLC术后手术标本（含1例术前活检对照）进行了检测，共检测了45种抗体：

PCF(CODEX)空间单细胞蛋白组在该研究中是不可替代的，它为整个研究的科学假说提供了空间组织层面的核心证据：PD-1阻断诱导的成熟TLS及其中的浆细胞是肿瘤特异性抗体的来源。没有PCF(CODEX)，研究者将丢失空间维度的证据链，难以完整回答：（1）这些肿瘤特异性抗体在哪里产生？（2）它们产生的免疫结构基础是什么？，这两个前置性问题。这提示我们，在肿瘤免疫学研究中，PCF(CODEX)空间单细胞蛋白组已经从"锦上添花"变成了"不可或缺"的组成部分。

1. 空间多维度解析肿瘤免疫微环境

PCF(CODEX)使研究者在一个组织切片上同时检测了 40+ 种蛋白标志物。PCF(CODEX)通过Barcode偶联抗体和循环成像技术，突破了低通量蛋白检测这一限制，最多实现100+蛋白检测，实现了真正意义上的超高重蛋白原位分析。

2. 可视化并量化三级淋巴结构（TLS）的空间组织

PCF(CODEX)使研究者能够在整体组织切片上空间定位TLS，并将TLS内的细胞进行邻域聚类分析，将细胞归类到不同的空间邻域。根据细胞组成和Ki67增殖活性将TLS分为三个成熟状态：未成熟、静止成熟、增殖成熟。量化每个组织中TLS的细胞组成比例、B细胞Ki67+分数、TLS密度等指标。

3. 揭示PD-1阻断前后免疫微环境重塑

PCF(CODEX)提供了治疗前后组织样本（治疗前穿刺 vs 治疗后切除标本）的直观空间对比，清楚地展示了PD-1阻断后TLS数量显著增加，包含GC CD4+ T细胞、Ki67+CD20+ B细胞及周围环绕的CD138+CD38+浆细胞的成熟TLS大量出现，并发现了CD138+CD38+浆细胞在肿瘤基质和实质中广泛分布。

4. 将空间信息与病理反应关联

PCF(CODEX)使研究者能够将TLS密度、成熟状态等空间参数与患者的病理缓解率进行关联分析，为理解免疫治疗疗效的空间决定因素提供了关键数据。

| 参考文献

Meyerhoff RR, Chen A, O'Brien J, Anadon CM et al. Tumor-infiltrating plasma cell profiling after PD-1 blockade reveals tumor-specific antibodies. Cancer Cell. 2026:S1535-6108(26)00310-7.

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